普通PCR與熒光定量PCR不同點(diǎn)比較

        普通PCR又稱(chēng)終點(diǎn)PCR，是最傳統(tǒng)與基礎(chǔ)的PCR方法，這種方法通過(guò)在產(chǎn)物正常擴(kuò)增結(jié)束后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺電泳等方式對(duì)產(chǎn)物染色、拍照，通過(guò)得到的條帶亮度對(duì)PCR產(chǎn)物的量、片段長(zhǎng)度進(jìn)行分析。但是我們要注意很重要的一點(diǎn)，普通PCR不能反映反應(yīng)體系的起始狀態(tài)，即樣品差異、擴(kuò)增效率差異等多種情況都可能會(huì)導(dǎo)致最終的擴(kuò)增效果，所以這種方法比較適用于疾病診斷與某些定性研究分析。

       熒光定量PCR即qPCR、Real-time PCR，都是實(shí)時(shí)定量PCR。其原理就是在PCR反應(yīng)體系中加入特定的探針，其中含有熒光基團(tuán)，熒光定量PCR儀在每一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)都會(huì)收集積累的熒光信號(hào)，從而達(dá)到對(duì)反應(yīng)體系的全程監(jiān)控與定量分析，所以qPCR既可以反映反應(yīng)體系的起始狀態(tài)，也可以反映最終擴(kuò)增效果，相比于普通PCR更精確，更簡(jiǎn)單。

       普通PCR與熒光定量PCR二者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，都能說(shuō)明生物體外的特殊DNA復(fù)制的整個(gè)過(guò)程的擴(kuò)增效率和溶解溫度情況。但是二者的不同主要集中  在以下幾個(gè)方面：

1、二者原理不同

熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通OCR通過(guò)檢測(cè)插入DNA中核算染料的量來(lái)測(cè)定PCR最終產(chǎn)物量。

2、二者系統(tǒng)組成不同

熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。

3、二者反應(yīng)要求不同

熒光定量PCR對(duì)擴(kuò)增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通PCR可以擴(kuò)增長(zhǎng)點(diǎn)的片段。

4、二者應(yīng)用不同

熒光定量PCR主要是用來(lái)定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的，普通的PCR儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段，定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作，反之不行。

5、二者測(cè)量成本不同

定量PCR儀價(jià)格較為昂貴，普通的基因擴(kuò)增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。但是價(jià)格要低很多，而且運(yùn)行成本也要低很多。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。