單克隆抗體和多克隆抗體的用途及選擇要點

一、單克隆抗體和多克隆抗體的用途：

1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個關(guān)鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。

2、抗體的特異性是由其結(jié)合域和目標抗原之間的相對親和力決定的，而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學研究人員和臨床醫(yī)生來說是至關(guān)重要的，因為許多應(yīng)用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來專門檢測目標分子。結(jié)合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個重要的參數(shù)，決定了它在實驗室的實用性。

3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應(yīng)用，如免疫沉淀、West Blot 和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），因為它們能夠識別低水平的目標抗原。

免疫沉淀是一種分析技術(shù)，通過使用特異性結(jié)合抗原的抗體將抗原從混合物中分離出來。然后用固定化抗體或磁珠對產(chǎn)生的抗原-抗體復(fù)合物進行進一步處理，從而使抗原-抗體復(fù)合物在分析前從混合物中分離出來。

4、與免疫沉淀法一樣，ELISA 可以使用多克隆或單克隆抗體來檢測溶液中的目標抗原。

5、間接和夾心 ELISA 是兩種免疫測定形式，在整個過程中使用兩種類型的抗體：單克隆抗體由于對目標抗原的高特異性，通常首先應(yīng)用（一級）；多克隆抗體由于能夠以高靈敏度放大低信號，因此作為二級試劑更有用。

6、除了 ELISA，抗體對于免疫組化和流式細胞儀等檢測技術(shù)也很有用，因為它們可以以高分辨率檢測復(fù)雜組織或細胞內(nèi)的抗體-抗原構(gòu)建。

企業(yè)對抗體特異性和靈敏度的確認使得像 ELISAs 這樣的免疫測定可以根據(jù)抗原和抗體的使用方式而采取不同的形式，這使得這些測試具有高度的通用性。例如，一種免疫測定需要高度敏感的測試來檢測一種未知的病原體，由于多克隆抗體能夠識別一種抗原上的多個表位，因此會從多克隆抗體中獲益。如果一個病原體或抗原先前已經(jīng)被定性，那么在下游應(yīng)用中使用單克隆抗體來進一步定性可能更合適。

7、在實驗室外，抗體可以被用來增強、模仿或恢復(fù)免疫系統(tǒng)攻擊疾病目標的能力。除了一些例外，單克隆抗體比多克隆抗體更適合于治療目的，因為它們具有同質(zhì)性，對單一表位的高特異性和低程度的交叉反應(yīng)。8、這些特性對于有效的癌癥治療特別重要，因為腫瘤細胞能夠逃避或阻斷免疫系統(tǒng)。單克隆抗體療法對癌細胞發(fā)揮作用的一些方式包括涉及直接結(jié)合以誘導(dǎo)細胞死亡的機制和阻斷腫瘤生長因子和血液供應(yīng)的間接機制。

二、單克隆抗體（. 一抗）和多克隆抗體（二抗）的選擇要點：

1. 一抗選擇要點

（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。

（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明 書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的 抗體。

（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。

（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2. 二抗選擇要點

（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。