ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線問題解答

    ELISA原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。

那么在ELISA實(shí)驗(yàn)中，這一方面該如何處理呢？下面對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的技術(shù)解答內(nèi)容：

  1.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度*陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

  2.采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

  3.樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

  4.做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999。

  6.檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

  7.標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法：

  標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度得到后，可通過計(jì)算器、Excell或SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行繪制，并得到相關(guān)的回歸方程（即計(jì)算公式）和相關(guān)系數(shù)（回歸系數(shù)）。Excell軟件比較好用一些；SPSS也行，不過是英文的，初學(xué)者不是很容易掌握；計(jì)算器嘛太麻煩了，所以現(xiàn)在一般不用。