商品屬性：

產(chǎn)品名稱	近平滑假絲酵母基因組DNA
英文名稱	Genomic DNA from Candida parapsilosis
規(guī)格	5μg/支
貨號	BJ-J2138

商品詳情

培養(yǎng)基	酵母浸粉：3.0，麥芽提取物：3.0，葡萄糖：10.0，酪蛋白胨：5.0，瓊脂：20.0，pH：6.2±0.2（25℃）
傳代方法	使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽； 1.取酵母細胞（最多不超過5×107cells），12,000rpm(13,400×g)離心1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）； 2.酵母細胞壁的破除：酶法：向菌體中加入600μL山梨醇buffer，加入大約50U Lyticase，充分混勻。30℃處理30min。4000rpm(1500×g)離心10min，棄上清，收集沉淀。注意：以上為5×107酵母細胞的Lyticase用量，根據(jù)酵母的菌株和酵母細胞數(shù)量的不同，所用Lyticase的濃度和孵育時間應(yīng)該進行適當(dāng)調(diào)整； 3.向沉淀中加入200μL緩沖液GA重懸沉淀，充分混勻。如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液，振蕩15sec，室溫放置5min； 4.加入20μL Proteinase K溶液，混勻； 5.加入220μL緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取的DNA不純； 6.加220μL無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠； 7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中； 8.向吸附柱CB3中加入500μL緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中； 9.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中； 10.重復(fù)操作步驟9； 11.將吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)離心2min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗； 12.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μL洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)離心2min，將溶液收集到離心管中。注意：為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12,000rpm(13,400×g)離心2min。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解；
生長條件	30℃；18-24h；好氧；
存儲條件	2-8℃
安全等級	0
共享方式	公益性共享