pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達(dá)）

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達(dá)）	20 次	BJ-PJ6531

商品介紹：

保存條件：-20℃保存
產(chǎn)品介紹：
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點將PCR產(chǎn)物定向克隆到線性化的pBM40哺乳動物表達(dá)載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。引物CMVforward和SV40PolyArev可用于菌落PCR和測序鑒定。
產(chǎn)品特點：
（1）連接反應(yīng)僅需 5 分鐘。
（2）只適合平末端 PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。
（3）載體采用了新的制備工藝，零背景，無需藍(lán)白斑篩選。
（4）具有 CMV 啟動子，適用于外源基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)，帶新霉素抗性基因，便于穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。C 端帶 FLAG 標(biāo)簽序列便于表達(dá)的目的蛋白質(zhì)的檢測。
（5）相對于 pcDNA3.1 等其它哺乳動物表達(dá)載體，pBM40載體具有更小的質(zhì)粒骨架，轉(zhuǎn)染效率高。
（6）載體具有卡那霉素和新霉素抗性。
注意事項：
（1）引物要求：PCR 引物 5’端不能進(jìn)行磷酸修飾，普通商業(yè)化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四個堿基（CACC 為真核表達(dá)所必需的 Kozak 序列）。如果目的蛋白需要在 C 端帶 FLAG 標(biāo)簽，下游引物則需要去掉基因本身的終止密碼子（3 個堿基），目的蛋白的翻譯終止由 FLAG 標(biāo)簽的終止密碼子 TAA（位于 Xho I 酶切位點前）來實現(xiàn)。
（2）DNA 聚合酶：選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 擴(kuò)增。
（3）連接時間：5-15 分鐘，通常用 15 分鐘。
（4）連接溫度：室溫 (22℃-30℃)，可使用 PCR 儀控溫。最佳反應(yīng)溫度為 25℃。若片段存在高 GC 等復(fù)雜結(jié)構(gòu)，可在 37℃反應(yīng)。