大腸桿菌蛋白提取液

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
大腸桿菌蛋白提取液	100ml	BJ-PJ6654

商品介紹：

描述：生產(chǎn)的大腸桿菌蛋白提取液采用獨特的中性裂解 配方，從而最大限度的提高了后續(xù)提取蛋白的活性。使用該 溶液從大腸桿菌中提取蛋白不需要超聲波破碎等復雜的操 作步驟，溶液置于 4°C 可長期保存，使用方便。該溶液室溫 30min 可破碎 95％以上的細胞，裂解后的溶液可直接通過 Ni-NTA 等純化填料進行蛋白純化。該溶液既可適用于小量 蛋白表達檢測，也適用于大量蛋白的表達純化試驗；既適用 于純化可溶型蛋白，也適用于純化包涵體蛋白。
主要特征
♦ 單組分溶液，使用方便
♦ 裂解迅速，蛋白不會變性
♦ 適用于小量或大規(guī)模蛋白表達
♦ 適用于可溶性蛋白和包涵體純化
應用：大腸桿菌的裂解和包涵體純化。
儲存：置于 4°C 可保存 2 年。
操作方法
♦ 可溶型蛋白操作方法（1 ml 菌液為例）
1. 8,000rpm 室溫離心 3min 后，棄上層培養(yǎng)基，留取管底部菌體（盡量棄除掉培養(yǎng)基）。
2. 加入 200 μl（重懸體積不得少于 50 μl）大腸桿菌蛋白提取液重懸菌體，用吸頭吹打至無可見細胞團塊。
注：為降低溶液粘度，可加入 Benzonase 核酸內(nèi)切酶至 0.25U/μL；加入終濃度為 1 mg/ml 的溶菌酶效果更佳。
3. 置于室溫孵育 30-60min，期間輕彈離心管數(shù)次以加速裂解。
4. 裂解完成后 13,000rpm 于 4℃離心 15-20min，將上清轉(zhuǎn)移至新的容器中，溶液可直接進行下一步純化或檢測試驗。
♦ 包涵體蛋白操作方法
5. 上述步驟 4 中，棄上清，保留沉淀組分，用 200 μl 的大腸桿菌蛋白提取液重懸沉淀。
6. 加入溶菌酶至終濃度 1 KU/ml，混合均勻，室溫孵育 10min。
7. 加入 800 μl 的滅菌水混合均勻。
8. 13,000 rpm 室溫離心 15-20min，棄上清后用 900 μl 滅菌水重懸沉淀，然后加入 200 μl 大腸桿菌蛋白提取液，混合均勻。
9. 13,000rpm 室溫離心 15-20min，重復步驟 8 三至五次。
10. 將沉淀溶解于變性溶液中，進行下一步純化或復性試驗。